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            螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒)/20T/F6075S
            • 螞蟻淘/Dualucif<sup>TM</sup> Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒)/20T/F6075S

            螞蟻淘/DualucifTM Firefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒)/20T/F6075S

            價格: ¥286.00 市場價: 476.67

            貨號: F6075S
            品牌: ebiomall
            規格
            數量
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            • 使用說明
            • 常見問題
              • 產品概述:

                儲存條件

                -80℃保存。將 C 組分溶解到 B 組分后,該混合液不可反復凍融,建議進行小批量分裝,并于-20℃(最長可儲存 1 個月)或-70℃(最長可儲存 1 年)條件下儲存。Renilla Luciferase Assay solution(D+E)應新鮮配制,當天使用。有效期見外包裝。

                組分

                規格

                F6075S(20T)

                F6075M(100T)

                F6075L(1000T)

                A.5× PassiveLuciferase Lysis Buffer

                2×1mL

                10 mL

                100 mL

                B.FireflyLuciferase Assay Buffer

                2×1mL

                10 mL

                100 mL

                C.D-Luciferin

                0.4 mg

                2 mg

                20 mg

                D.RenillaLuciferase Assay Buffer

                2×1mL

                10 mL

                100 mL

                E.50×Coelenterazine

                40 μL

                200 μL

                2×1mL

                產品介紹DualucifTMFirefly & Renilla Assay Kit(雙螢光素酶報告基因檢測試劑盒)為檢測基因的表達量提供有效的手段,在 DLR檢測中,螢火蟲螢光素酶(Firefly luciferase)和海腎螢光素酶(Renilla luciferase)的活性可在單個樣品中依次檢測。先以螢光素(Luciferin)為底物來檢測螢火蟲螢光素酶的活性,然后加入抑制螢火蟲螢光素酶催化的物質,同時加入腔腸素(Coelenterazine)檢測海腎螢光素酶的活性,實現雙螢光素酶報告基因檢測。通過螢光素酶和其底物這一生物發光體系,可以非常靈敏、高效地檢測基因的表達。通常把感興趣基因的轉錄調控元件或5" 啟動子區克隆在Luciferase的上游,或把3"-UTR 區克隆在Luciferase的下游,構建成報告基因(Reporter gene)質粒,然后轉染細胞,用適當藥物等處理細胞后裂解細胞,通過檢測螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對目的基因的轉錄調控作用。海腎螢光素酶更多地被用作檢測轉染效率的內參,以消除細胞數量和轉染效率的差異。
                螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61 kD 的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化螢光素生成氧化螢光素(Oxyluciferin),在螢光素被氧化的過程中,會產生光信號。海腎螢光素酶是一種分子量約為36 kD的蛋白,在氧氣存在的條件下,可以催化腔腸素氧化成腸酰胺(Coelenteramide),在腔腸素氧化的過程中也會產生光信號。本試劑盒的光信號可以通過化學發光儀、酶標儀或液閃測定儀進行測定。該試劑盒具有檢測迅速、靈敏度高、檢測范圍廣,無細胞內源活性干擾等特點。

                注意事項1. 為取得最佳測定效果,在用單管的化學發光儀測定時,樣品和測定試劑混合后到測定前的時間應盡量控制一致;使用具有化學發光測定功能的多功能熒光酶標儀時,宜先把樣品全部加好,然后統一加入螢火蟲螢光素酶檢測試劑。2. 由于溫度對酶反應有影響,所以測定時,樣品和試劑均需達到室溫后再進行測定。3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
                說明書:UE-F6075S/F6075M/F6075L
                MSDS:MSDS F6075 Dual Luciferase Assay Kit
                常見問題解答:◆雙螢光素酶報告基因最適反應溫度?

                室溫(20-22℃)。反應時各個組分(細胞裂解產物,底物工作液等)都需要調整到室溫。此兩種螢光素酶的反應速率是受溫度影響的,為了保證實驗的一致性,我們推薦此兩種工作液在檢測時都孵育至室溫。◆雙螢光素酶報告基因載體該如何選擇?(1)螢火蟲報告基因質粒原則上含有luc基因就可以,但是不同實驗所需的載體有一定差異,如果您要自己構建載體,要注意有些載體沒有啟動子,需要自行插入啟動子,如pGL3 Basic。(2)海腎報告基因質粒盡量選擇中等強度的啟動子,如TK啟動子等,不要選擇強啟動子CMV、SV40等。海腎基因的表達活性應顯著高于背景組,同時不干擾螢火蟲螢光素酶報告基因的表達。。◆檢測的螢光數值很低怎么辦?(1)可能為轉染效率低a.優化轉染實驗條件,用較易轉染的質粒做陽性對照(如轉染過表達熒光蛋白質粒);b.確保轉染DNA的質量,可通過酶切或瓊脂糖凝膠電泳的方法對DNA質量進行鑒定;c.選擇活性較高,處于指數分裂期的細胞進行轉染。(2)可能為啟動子活性低或誘導失敗a.轉染后的細胞培養使用特異性誘導啟動子的條件;b.優化細胞的培養條件,提高螢光素酶的表達量;c.更換強啟動子(如SV40、CMV)。注:海腎螢光素酶基因作為內對照,其表達應不受時期、部位、環境影響,因此常用組成型表達的TK啟動子。(3)樣品裂解效率低a.細胞培養時間不宜過長,12-36h內最好,長時間培養后,細胞可能會難裂解。b.加入的裂解液需足量,保證細胞能夠充分裂解。(4)檢測過程操作不規范a.選擇合適的檢測儀器,能夠檢測化學發光或者生物發光的儀器都適用于該實驗;b.需加入足量底物,保證底物的飽和,否則會造成檢測結果出現很大偏差;c.室溫反應。反應時各個組分(細胞裂解產物,底物工作液等)都需要調整到室溫;d.螢光素酶的半衰期一般約30min,加完底物后可立即檢測,盡量在30min內完成。(5)底物氧化失效a.底物避光密封保存,螢火蟲螢光素酶底物-20℃保存;海腎螢光素酶底物推薦-80℃保存;b.反應工作液建議現用現配。

                使用本產品的文獻:參考文獻1.DDX3 Activates CBC-eIF3-Mediated Translation of uORF-Containing Oncogenic mRNAs to Promote Metastasis in HNSCC.應用方向:基因轉錄調控檢測2.Glucose starvation induces LKB1-AMPK-mediated MMP-9 expression in cancer cells.應用方向:基因轉錄調控檢測3.Repression of MAP3K1 expression and JNK activity by canonical Wnt signaling.應用方向:基因轉錄調控檢測4.The cellular stress proteins CHCHD10 and MNRR1 (CHCHD2): Partners in mitochondrial and nuclear function and dysfunction.應用方向:基因轉錄調控檢測5.Large-Scale Screening of Natural Products Transactivating Peroxisome Proliferator-Activated Receptor α Identifies 9S-Hydroxy-10E,12Z,15Z-Octadecatrienoic Acid and Cymarin as Potential Compounds Capable of Increasing Apolipoprotein A-I Transcription in Human Liver Cells.應用方向:基因轉錄調控檢測
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