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產品介紹 Human IFN-γ ELISA Kit (Human Interferon-γ Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即人γ干擾素 ELISA 試劑盒，可以定量檢測人血清、血漿或細胞培養上清液等樣本中的天然和重組 IFN-γ濃度。γ干擾素也稱為Ⅱ型干擾素，是細胞因子超家族中 IFN 家族的重要成員，具有廣泛的生物學功能，如抗病毒、抗腫瘤、免疫調節、調控細胞增殖和分化等。人 IFN-γ基因定位于第 12 號染色體，在 DNA 水平上 IFN-γ基因與 IFN-α/β基因無同源性。成熟的人 IFN-γ分子是由 143 個氨基酸組成的分泌型糖蛋白，以同源二聚體形式存在，分子量為 40 kDa，其生物學作用有嚴格的種屬特異性。人 IFN-γR 基因定位于第 6 號染色體。IFN-γR 為跨膜糖蛋白，胞膜外區、跨膜區和胞漿區分別有 228、21 和 223 個氨基酸殘基，從胞膜外區結構特征來看，屬于細胞因子受體、干擾素受體家族，最近命名為 CDw119。IFN-γ與受體結合后可活化多種 IFN-γ調節的基因。目前已知，IFN-γ刺激后至少有 20 種蛋白被表達，其中 12 種是 IFN-γ刺激后所特有的。這種表達是由于活化特異的 DNA 結合蛋白使其從胞漿移位到胞核，如干擾素刺激的基因因子 2 (interferon-stimulated gene fac-tor 2, ISGF2)和γ-干擾素激活因子(gamma-interferon activation factor, GAF 或 STAT 91) 結合到 IFN 基因啟動子中兩個稱之為γ干擾素活化點 (gamma-interferon activation site, GAS)和干擾素刺激的反應元件(interferon-stimulated response element, ISRE)的位置上。IFN-γ主要由活化的 T 細胞和 NK 細胞產生，其生物學作用具有較嚴格的種屬特異性，人 IFN-γ只作用于人或靈長類動物的細胞。在許多病理情況下，IFN-γ作為疾病的標志物的作用已得到證實。病毒感染時，IFN-γ產生。IFN-γ可作為鑒別結核性與非結核性腹水的診斷工具。IFN-γ在結核性腹水中的濃度顯著高于非結核性腹水，靈敏度和特異性均達到 100％。IFN-γ對多發性硬化癥的免疫治療的設計及檢測有重要意義。在移植物排斥反應臨床癥狀出現前，IFN-γ的表達量增加；I 型糖尿病的初期，IFN-γ的產生顯著下降。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中人IFN-γ 濃度。在人 IFN-γ單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的 IFN-γ會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗人 IFN-γ抗體，抗人 IFN-γ抗體與結合在單抗上的人 IFN-γ結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有 IFN-γ，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現藍色；加終止液變為黃色。在 450 nm 下測 OD 值，人 IFN-γ 濃度與 OD 450 值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中人 IFN-γ濃度。
UE-H6125S/H6125M/H6125L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現規則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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