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注：終止液和顯色劑具有腐蝕性，一旦接觸到液體，請盡快用大量清水沖洗。
產品介紹 Mouse VEGF ELISA Kit (Mouse Vascular Endothelial Cell Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit) ，即小鼠血管內皮生長因子 ELISA 試劑盒，可以定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養上清液等樣本中的天然和重組 VEGF 濃度。小鼠 VEGF 是單基因產物，包含 8 個外顯子。由于 mRNA 剪接方式不同，產生了單鏈分別含 120，164 和 188 個氨基酸的不同變異體，它們與肝素的結合能力不同。小鼠 VEGF164 的氨基酸序列與大鼠、犬、豬、豚鼠（8）和人分別有 98%、90%、87%和 82%的同源性。骨骼肌，心肌，肝細胞，成骨細胞，中性粒細胞，巨噬細胞，角質形成細胞，血小板，褐色脂肪組織，CD34 +細胞，星形細胞，神經元和內皮細胞等多種細胞和組織均可產生 VEGF。血清和血漿樣本均可檢測到VEGF，由于血小板可釋放VEGF，因此血清中VEGF含量較高。VEGF是一種特異作用于血管內皮細胞的多功能細胞因子，可增加血管通透性、促進血管形成、引起細胞外基質成分改變等。目前，VEGF 和 VEGFR 因其在腫瘤血管生成中的重要作用而成為抗腫瘤血管生成療法的重要靶點。目前應用單克隆抗體、小分子抑制物、反義寡核苷酸，可溶性受體等方法通過阻斷其信號轉導通路或耗竭腫瘤細胞產生的 VEGF，下調 VEGF 或 VEGFR 的表達，從而抑制腫瘤血管生成，切斷腫瘤血供，最終達到抑制腫瘤生長及轉移的作用。本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣品中小鼠 VEGF濃度。在小鼠VEGF單克隆抗體預包被酶標板中加入適度稀釋的樣品和標準品，其中的VEGF會與其單抗結合，洗去游離成分；加入生物素化的抗小鼠VEGF抗體，抗小鼠 VEGF抗體與結合在單抗上的小鼠VEGF結合而形成免疫復合物，洗去游離的成分；加入辣根過氧化物酶標記的親合素，生物素與親合素特異性結合，洗去未結合的酶結合物；加入顯色劑，若反應孔中有VEGF，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑出現藍色；加終止液變為黃色。在450 nm下測OD值，小鼠VEGF濃度與OD 450值之間呈正比，可通過繪制標準曲線計算出樣品中小鼠VEGF濃度。
UE-M6153S/M6153M/M6153L◆沒有信號？1.試劑添加順序錯誤或試劑配制不正確。重復實驗；檢查試劑配制方法；復核試驗試劑添加流程。2.HRP被疊氮化合物污染。使用新鮮配制的試劑。3.抗體用量不足。檢查是否使用了推薦的抗體量；增加抗體用量（濃度）。4.使用了含胎牛血清的緩沖液復溶抗體。檢查使用的試劑。5.捕獲抗體與板結合較差。使用ELISA板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。6.緩沖液受污染。新鮮配置緩沖液。◆整塊板呈現規則藍色？1.洗板不充分或跳過洗滌步驟未去除殘留的非結合過氧化物酶。嚴格按照說明書洗滌流程操作。2.底物溶液預混太早不新鮮。底物溶液混合后須立即使用。3.封板膠紙或試劑儲液槽重復使用導致HRP殘留污染。每步均需使用新的封板膠紙或試劑儲液槽。4.緩沖液有金屬或HRP污染。新鮮配置緩沖液。◆標準曲線差？1.鏈親和素-HRP結合物量不足。檢查倍性稀釋是否正確。2.捕獲抗體與板結合較差。使用酶標板，而非組織培養板；使用不含其他雜蛋白的PBS溶解抗體。3.檢測抗體量不足。檢查稀釋度是否正確。4.孵育時間不足。延長底物溶液孵育時間。5.實驗操作流程有誤。嚴格按照說明書操作流程。6.標準曲線稀釋計算錯誤。重新計算制作新的標準曲線。
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